El retablo, encuadrado en un gran marco dorado con claras influencias del rococó, se halla dividido, como los grandes cuadros del Greco, en dos partes superpuestas: abajo, las ánimas, en pronunciado relieve, padeciendo los tormentos del Purgatorio; arriba, una representación de la Gloria, en la que no falta un santo benedictino, y entre ambas partes, San Miguel con la balanza en la mano y dos angelitos que acuden a salvar almas.

La construcción de este retablo, realizada hacia 1760 por Francisco Calvo, se halla dentro de la reforma artística emprendida en el edificio a partir de 1751, donde tuvo gran importancia el escultor e imaginero sevillano Pedro Duque Cornejo a la hora de diseñar y ejecutar varios de sus bienes muebles.

Para la talla del retablo, la Cofradía de Ánimas contribuyó con 2.208 reales, y además costeó los gastos del arreglo del altar, blanqueo y peana de piedra de jaspe. Una vez terminado, el retablo fue dorado y pintado entre 1769 y 1770 por José Carazo y Francisco Gavariño.

La típica decoración rococó de la pieza se manifiesta en el uso de las rocallas, las flores asimétricas y los pequeños tondos ovales, junto con marcos arriñonados y elementos sueltos con relieves que componen una vanitas, algo obsoleto en su centuria, justificado por el tema, que responde por otra parte a la tradición del retablo anterior al que sustituye, dedicado también a las Ánimas del Purgatorio. 

Hoy en día, no sólo está considerado como uno de los más interesantes del templo, sino también como uno de los que mayor devoción siguen despertando. Nunca faltan flores frescas en el banco del retablo e incluso hay quienes besan las calaveras de los relieves inferiores -una de ellas coronada y la otra tocada con tiara papal- y se santiguan ante ellas para continuar el culto milenario a la presencia de los muertos en un espacio indeterminado entre el cielo y la tierra, cuya estancia fue incluso calculada en años y días por venerables personajes, considerados visionarios, como la Madre María Jesús de Ágreda.